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      豚鼠接觸蛋白2(CNTN2)ELISA試劑盒

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      上海信帆生物供應豚鼠接觸蛋白2(CNTN2)ELISA試劑盒,提供技術指導和售后服務。本公司銷售的試劑盒均采用進口材料生物試劑,具有操作簡單,靈敏度高等特點,咨詢

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      豚鼠接觸蛋白2(CNTN2)ELISA試劑盒
      本試劑盒含量是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系
      問題1:如果我們代測的樣本是組織樣本,請問應該選用什么來組織勻漿,濃度是多少?
      答:一般我們試劑盒的組織勻漿,都是按照10%進行勻漿,即1g組織加9ml的勻漿液,勻漿液可以選取生理鹽水,也可以選取PBS,但*是PBS,PH=7.2-7.4,濃度為0.01mol.
      問題2:請問試劑盒在zui后計算的時候,用一般試劑盒測要測組織蛋白濃度,zui后計算出來的,我們的試劑盒是不是也需要這樣操作?具體怎么計算?
      答:對于組織樣本來講,我們建議做蛋白定量.然后把測得的結果比上蛋白定量的結果,zui終得到每g蛋白中含有指標的量,這樣更為準確!如果不做蛋白定量的話,就是得到每g組織中含有量!
      問題3:請問我訂購了你們的試劑盒,但是樣本是分批次收集的,我可以分批次實驗嗎。
      答:可以的,我們的試劑盒橫條是可拆卸的,試劑盒使用之后放到2-8度冰箱保存,下次可以繼續使用,但是建議是拆封之后一個月內用完。
      問題4:請問各種標本的處理方式,你可以發給我一下嗎?
      答:當然可以。標本要求如下:
      在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃備用,有條件的,-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。
      液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
      1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
      2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
      3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參? 照此實行。
      4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
      5.培養細胞:檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
      6.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
      7.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
      8.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
      問題5:麻煩把試劑盒的具體操作步驟發給我一下,謝謝!
      答:好的,詳細的操作步驟如下:
      1. 加樣:標準品設定5個濃度點10個孔,每個濃度設定平行孔,加入50微升不同濃度的標準品,空白孔設定1個孔加入50微升蒸餾水(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔,在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
      2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
      3. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
      4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
      5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
      6. 溫育:操作同3。
      7. 洗滌:操作同5。
      8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
      9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
      10. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
      豚鼠接觸蛋白2(CNTN2)ELISA試劑盒
      問題6:試劑盒操作過程中有什么注意事項嗎?
      答:有的,具體的注意事項如下:
      1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
      2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
      3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣。
      4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
      5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
      6. 底物請避光保存。
      7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
      8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
      9. 本試劑不同批號組分不得混用。
      11. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
      問題7:請問操作完之后,應該怎么計算呢?
      答:你好,操作完成之后,詳細的計算方式是:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
      問題8:請問你們試劑盒的性能如何?
      答:試劑盒性能的性能我們是通過幾個數值反應的:1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以上。2.批內與批間應分別小于9%和11%
      豚鼠接觸蛋白2(CNTN2)ELISA試劑盒
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